[文献共享]评估四倍抗生素鸡尾酒溶液的效率，例如庆大霉素，以控制牛冷冻精液的致病细菌

[文献共享]评估四倍抗生素鸡尾酒溶液的效率，例如庆大霉素，以控制牛冷冻精液的致病细菌

等。来自美国威斯康星大学（麦迪逊）的一份研究论文，题为“ of” of“ of”。

文章指出，人工授精（AI）可能会将病原体引入牛群。自1988年以来，使用的GTLS抗生素鸡尾酒（包括庆大霉素，泰糖苷，林霉素，壮观的）用于控制牛精液中的病原体，但其对牛肉菌（）的影响。通过在GTLS处理的牛精液中添加各种菌株，作者发现GTLS对胎儿弯曲杆菌的亚种有杀菌作用（。 15％GTLS浓度没有显着抑制。

作者认为，他们的研究提供了全球牛精液治疗期间使用抗生素的经验证据：在维护现有的GTLS方案以控制大多数病原体以控制大多数病原体，需要对针对支原体传播风险建立补充措施，例如精液筛查，例如，诸如非抗生素抗生素抗生素型抑制剂（例如诸如近抗生素蛋白酶）（例如，诸如抑制型抑制剂）（例如）优化冻结过程以增强药物渗透。此外，研究方法中使用的自然应变接种，动态时间监测以及洗涤和药物去除验证还为类似研究提供了标准化的操作参考。

附件：详细解释

1。研究背景

作为一种常用的牛育种技术，人工授精被广泛用于牛育种，繁殖和遗传改善，但其潜在的病原体传播的潜在风险对动物健康构成了重要的威胁。胎儿弯曲杆菌亚种（。），组织杆菌（），（），霉菌性牛肉菌（）的病原微生物（例如弯曲杆菌）可以引起生殖障碍，可能会导致通过精液进行精液和全身感染，从而成为国际动物夫妇的关键目标，成为国际动物的关键目标。 1988年，Shin等人提出的GTLS抗生素鸡尾酒方案。 （包括庆大霉素250μg/mL，泰氏胞菌素50μg/mL，林科霉素150μg/mL和μg/ml）包括美国认证精液服务（CSS）的强制性标准，并已使用。但是，随后的研究表明，该方案对支原体牛的控制作用是有争议的。 （1999年）证实，它无法去除支原体牛，（2020）检测到冷冻精液中的活细菌，并且全球抗菌耐药性（AMR）问题的加强使得其实际应用性能迫切需要重新评估其实际应用性能。在这种科学和工业环境中，本研究旨在通过标准化的实验设计来验证GTLS方案对目标病原体的杀菌和抗菌作用，为优化精液治疗过程提供了经验基础，并降低了跨境传播的风险，并具有重要的理论和实践意义，并确保了全球级别的人工制作和实用的人工猫的健康和实用性。

2。材料和方法（i）实验材料

该研究从美国威斯康星州的CSS认证机构中选择了19个健康荷斯坦和泽西公牛，收集了新的精液，并自然地携带了组织瘤睡眠（H.）菌株（n = 6，由-TOF确定）。目标病原体覆盖：

革兰氏阴性细菌：C。标准菌株（ATCC）和牛野生菌株（分别从牛生殖道冲洗液和胎盘分别分离），问号钩端螺旋体型血清型菌株（SJL-060，国家兽医服务实验室）；无壁微生物：支原体牛标准菌株（ATCC，ATCC）和新西兰牛肺组织野生菌株（NZ-WT）和支原体尿道标准菌株（ATCC）。

精液稀释系统采用CSS推荐的卵（20％蛋黄Tris）和基于牛奶（3.5％全牛奶）培养基。在库存溶液处理阶段，新西兰修饰方案将GTLS浓度提高了15％（即2步浓度增加15％，并规定最低接触时间为4分钟。 （ii）实验方法

采用了两步稀释过程来模拟商业生产：

库存解决方案的抗菌治疗：根据CSS标准（3-5分钟）或新西兰方案（4分钟），将新精液与GTL（实验组）或PBS（对照组）完全接触，初始接种浓度为10⁵ -10⁷CFU/ML（适用于可培养的细菌）；梯度稀释和冷冻保存：添加含有抗生素的溶液A（不含甘油，GTL的最终浓度：500μg/ml，μg/mL，μg/mL，壮观的600μg/mL）和B（免费的14％gly ，in ，in ，in ，in ，in ，in ，in ， c（），在溶液A中，在溶液中处理4小时b），通过液氮蒸气（20-25分钟）和超低温度储存（-196℃）在35℃水浴中融化；动态实时细菌监测：在6个时间点，包括在接种后（T1），第一次稀释后（T2），第二次稀释后（T3），解冻后（T4），洗涤和去除药物后（T5，3 PBS中心清洗，12,000×G/5min），混合培养物（T6），T6，T6，T6，（T4），T6，T6，T6，TH （T6），（T4）。使用对照组30分钟）。盘子计数（5％绵羊血琼脂，琼脂，支原体琼脂），肉汤指示剂方法（SP4肉汤含有尿素和苯酚红色，适合于支原体尿道尿素），荧光和死亡的染色（染色，适用于瘦肉螺旋体）和光谱分析（补充溶血液）和其他技术和其他技术。统计分析：签名的等级测试（适用于完整的灭菌效应组）和配对t检验（适用于抗菌作用分析），显着性阈值设置为p≤0.05。

3。结果和分析（i）GTL对大多数致病细菌的杀菌作用

在两种稀释液中，组织瘤睡眠（H.）均表现出较高的药物敏感性：基于卵的稀释治疗组在解冻后无菌落生长（T4），基于牛奶的稀释组在第一次稀释后2小时降低了≥3log₁₀≥3log₁₀（T2），并在第二次稀释后4小时被完全杀死（T3）（T3）（T3）（图2B）。洗涤后的混合培养（T6）表明细胞的数量是初始值的50％，证实了抗生素有效去除（图2C）。在T4和T5时间点的胎儿弯曲杆菌亚种的标准菌株和野生菌株中未检测到存活的细菌。在T2时间点，细菌稀释剂的数量≥4log₁₀，一些样品被完全杀死（图3B，3D）。含有苯酚红的Sp4汤中的支原体尿道（U.），GTLS处理的组（1步和2步浓度）保持黄色（无生长）72小时，而对照组在48小时内变成红色（生长阳性），表明其繁殖受到了完全抑制。治疗后，与对照组相比，问号钩端螺旋体（L.）的值增加了45％（1：100稀释组的p = 0.023，在1：100稀释组中p = 0.018）。荧光染色表明，红细胞的比例占96.8％，显着高于对照组的绿色活细胞的比例（81.2％，图5）。

（ii）支原体的抗菌特性和改进方案性能

三种支原体牛（M.）菌株在GTLS治疗后显示出典型的抗菌特性：接种板中心的高药物浓度区域形成了一个抗菌环，直径为≥10mm，并且在边缘的低浓度区域可见菌落生长（图4）。解冻后直接培养的细菌数量（T4）比对照组低65-75％，但洗涤和去除药物后菌落数（T5）恢复到对照水平（P> 0.05），确保该药物没有引起细菌死亡，仅引起细菌死亡，并且仅抑制了增殖。在新西兰，浓度增加15％的改良方案（ABX ++）并未改变这种行动方式。 was no of ATCC, ATCC and NZ-WT at each time from the CSS (P>0.05), the of to on - they lack cell wall , and long-term may pump or ( 4C, 4F, 4I).

4。结论

这项研究系统地验证了GTLS抗生素鸡尾酒对牛弯曲杆菌的有效杀菌作用，对牛弯曲杆菌的亚种，组织效应，结霉菌尿素和瘦螺旋体在牛精液中通过多材料，多稀释，多稀释，多稀释系统和动态时间点监测。解冻后未检测到存活的细菌（T4）或洗涤和去除药物（T5），基于牛奶的稀释度在早期阶段显示出较高的杀菌效率（T2-T3）。但是，该方案仅显示浓度依赖性抗菌作用对分枝杆菌牛的抗菌作用。当前的CSS标准和新西兰修饰方案无法实现病原体的去除。在稀释后培养了三个测试菌株（T6），并恢复生长，证实它们的繁殖仅被暂时抑制而不是杀死。

前景

为了预防和控制支原体牛，有必要突破传统的抗生素框架并进行以下研究：1）基于其无壁特征，筛选靶向膜蛋白（例如固醇合成途径）的新的抗菌剂或发展特定的噬菌体； 2）优化稀释式，探索基于牛奶的成分（例如乳清蛋白）以增强药物渗透的机制，并提高细胞内寄生虫的有效性； 3）建立用于精液致病细菌的多PCR筛查和实时监测系统，将其与GTLS治疗前的病原体检测结合使用，以实现精确的预防和控制； 4）评估GTL长期使用对牛生殖道的微生态的影响，监控耐药基因的传播风险（例如ERMB，MSRE），并为制定可持续疾病控制策略的科学基础提供了科学基础。本研究中建立的标准化实验模型可以为相似的抗菌程序的有效评估提供方法论参考，并有助于对全球人工授精技术的安全升级。

局限性：

首先，尽管支原体牛的测试菌株涵盖了标准菌株和野生菌株，但样本量有限（3个菌株），不含临床上抗性菌株。结论对自然界中复杂细菌群的表示有一定的局限性。特别是考虑到支原体牛的耐药性在全球范围内趋于上升趋势，因此需要更多的区域性菌株来验证它以增强普遍性。

其次，该实验使用特定浓度的病原体的人工接种模型，这与实际精液中病原体的生物膜状态，协同或竞争关系不同，这可能会影响抗生素作用的实际评估。例如，病原体与自然感染中固有细菌之间的相互作用可能会改变药物敏感性。

此外，分枝杆菌尿道和钩端螺旋体的检测依赖于间接方法（乳房指示器，光谱分析）和活细菌，并未通过传统的板块计数来量化。检测结果的准确性有一定的局限性。特别是，钩端螺旋体实验未模拟精液稀释成分对细菌存活的影响。结论外推应该是谨慎的。此外，该研究仅评估了CSS标准和新西兰修改方案的GTLS浓度，并且没有探索其他可能的浓度梯度，接触时间组合或组合方案，这对优化抗生素配方的指导作用有限制。

最后，该实验没有评估GTL长期使用对牛生殖道的微生态平衡的影响，以及耐药基因水平转移的潜在风险，这是抗生素方案可持续性评估的重要组成部分。